<span id="i5rnx"><optgroup id="i5rnx"></optgroup></span>
    <span id="i5rnx"><optgroup id="i5rnx"></optgroup></span>

    <label id="i5rnx"><meter id="i5rnx"></meter></label>

    歡迎進入上海起發實驗試劑有限公司!
    技術文章
    首頁 > 技術文章 > SBI CAS720A-KIT說明書

    SBI CAS720A-KIT說明書

     更新時間:2018-06-13 點擊量:2474

     

     

    上海起發為System Biosciences特約經銷商,System Biosciences,簡稱SBI,美國加州灣區新成立的生技公司,致力于*、創新生物技術之開發,以研發利于基因及蛋白質功能鑒定、研究之嶄新方法和工具為宗旨。 現階段研發重心為RNA干擾(RNAi)研究之相關工具。 System Biosciences (SBI) 致力于開發*、革新的技術,為客戶研究蛋白組學和基因組學功能提供研究工具。SBI 是專業的慢病毒產品公司,提供基于慢病毒的所有相關產品、質粒、試劑盒及相關配套試劑和慢病毒延伸產品如IPS細胞多功能性誘導試劑盒和RNAi篩選文庫。

    SBI CAS720A-KIT說明書

     

    品牌:System Biosciences

     

    貨號:CAS720A-KIT

     

    品名:-T7-hspCas9-H1-gRNA All-in-one Cas9 SmartNucleaseTM Plasmid & Multiplex gRNA Cloning Kit

     

     

    產品信息

     

     

     

    增強您的一體化Cas9 SmartNuclease質粒與多路復用gRNA傳遞

     

     

    通過將CAG-T7-hspCas9-H1-gRNA一體化Cas9 SmartNuclease TM質粒與Multiplex gRNA克隆試劑盒相結合,輕松提高功能。總之,這兩種產品可以實現更廣泛的需要多種gRNA的復雜基因組編輯項目。

     

    您可以獲得CAG-T7-hspCas9-H1-gRNA All-in-one Cas9 SmartNuclease質粒的所有優點:

     

    • 方便地提供Cas9和gRNA與一個單一的載體
    • 用CAG啟動子驅動Cas9表達,其在原代細胞和干細胞中提供高表達水平
    • 從H1啟動子表達gRNA以獲得大特異性并選擇靶標
    • 確保有效利用N期和C期核定位信號(NLS)將Cas9導入細胞核
    • 在C-term NLS之后通過WPRE調控元件促進Cas9基因表達并穩定轉錄本
    • 用N-term myc-tag輕松檢測和/或純化Cas9蛋白
    • 使用T7啟動子通過體外轉錄產生Cas9 mRNA

    結合Multiplex gRNA克隆試劑盒的優點:

    • 一次編輯多個基因座,節省時間和試劑
    • 容易產生多順反子gRNA表達構建體
    • 適用于Cas9切割酶應用
    • 非常適合研究信號通路

    正如我們所有的Cas9交付選項一樣,CAG-T7-hspCas9-H1-gRNA質粒在功能上得到了驗證,并得到了我們的專家團隊的支持 - 如果您有基因組工程問題,只需通過電子郵件tech @ systembio發送問。 com

    為什么建議使用人力資源定位向量

    盡管單獨由Cas9引起的DSB可導致基因敲除,但SBI建議使用HR靶向載體(也稱為HR供體載體)以實現更有效和的突變。人力資源捐助者可以提供正面或負面選擇的要素,以確保更容易識別成功的突變事件。此外,HR供體可以包含高達6-8 kb的開放閱讀框用于基因敲入或標記,并且當5'或3'同源臂中包含小突變時,可以進行特定的靶向基因編輯。

    使用此表格選擇適合您的CRISPR / Cas9產品:

    對于此應用程序

    使用這些產品

    修改生物

    使用這些產品

    使用這些產品

    ·基因標記

    ·轉基因生物的產生

    ·模型生物工程

    創造轉基因動物

    ·注射Cas9 mRNA&

    ·gRNA合成試劑盒

    ·純化的Cas9蛋白

    動物模型中的體內基因組編輯

    ·AAV-Cas9載體

    ·純化的Cas9蛋白

     

     

     

    修改細胞系

     

     

    ·穩定的KO,KI和基因組

    ·編輯體細胞

    ·轉基因細胞系的生成

    ·基于細胞的疾病模型

    可轉染的細胞

    ·Cas9質粒

    ·純化的Cas9蛋白

    ·AAV-Cas9 Vect難以轉染細胞系,

    ·主要細胞

    ·造血細胞

    ·干細胞

    ·Lenti-Cas9系統

    ·AAV-Cas9載體

    ·Lenti-Cas9系統

     

     

     

    篩選

     

     

    ·全基因組調查

    ·gRNA庫屏幕

    ·功能屏幕

    所有應用都需要

    穩定的Cas9過表達

    ·Lenti-Cas9系統

    ·AAVS1安全港Cas9

    ·敲入系統

    ·純化的Cas9蛋白

     

     

     

    臨床前應用

     

     

    ·非目標事件是受關注的問題

    所有應用

    ·Cas9切割片,提供所有交付格式

    ·純化的Cas9蛋白

     

     

     

    多變量同時工程

     

     

     

    所有應用

    ·多重gRNA克隆試劑盒,兼容所有Cas9遞送選項

    使用SBI的一體化Cas9 SmartNuclease質粒和Mulitplex gRNA克隆試劑盒

    工作流程一目了然  

    圖1. Multiplex gRNA克隆試劑盒工作流程

     

    使用Multiplex gRNA克隆試劑盒準備您的多重gRNA插入片段(圖1)

    PrecisionX Multiplex gRNA克隆試劑盒提供H1和U6啟動子區域,可輕松構建多個gRNA盒(圖1)。在步驟1中,將含有所需gRNA(由用戶設計)和腳手架 - 啟動子區段(來自試劑盒)的重疊末端的引物在PCR反應中合并以產生含有兩種gRNA的PCR擴增子。在步驟2中,將PCR擴增子與融合反應混合物一起與用于無縫構建的線性化表達載體組合。

    • 轉化到感受態細胞中并在LB /卡那霉素平板(50μg/ ml)中生長
    • 通過直接測序確認陽性克隆
    • 使用標準轉染方案將經過序列驗證的一體化構建體轉染到哺乳動物細胞中(如果您的應用需要,與HR靶向載體共轉染)
    • 進行Surveyor核酸酶測定(或其他適合的錯配切割測定)以檢查位點特異性基因組切割并選擇期望的克隆

     

    用CRISPR / Cas9進行基因組工程

    有關使用CRISPR / Cas9技術進行基因組工程的一般指導,請查看我們的CRISPR / Cas9教程以及以下應用筆記:

    CRISPR / Cas9基因敲除應用簡報(PDF)» 
    CRISPR / Cas9基因編輯應用簡報(PDF)» 
    CRISPR / Cas9基因標簽應用簡報(PDF)»

     

    CRISPR / Cas9基礎

    通過仔細選擇靶序列和設計供體質粒進行同源
    重組,您可以使用CRISPR / Cas9實現且高度靶向的基因組修飾。

     

    系統

    Cas9蛋白質 - 指導RNA(gRNA)指導位點特異性雙鏈DNA切割,與目標DNA中的原型銜接子基序(PAM)相鄰。

    引導Cas9切割靶基因組中的同源區域的gRNA- RNA序列。僅當gRNA同源性與PAM相鄰時才有效切割。

    PAM- prototospacer銜接子基序NGG是目標DNA序列,如果指向gRNA,spCas9將從上游切除。

     

    工作流程一目了然

    設計:選擇gRNA和HR供體質粒。選擇gRNA位點并設計供
    體質粒決定同源重組事件是否導致敲除,
    敲入,編輯或標記。

     

    構建:將gRNA克隆到一體化Cas9載體中。將5'和3'同源臂克隆到HR 
    供體質粒中。如果創建基因敲入,將所需基因克隆到HR供體中。

     

    共轉染CO-INJECT:介紹Cas9,gRNA和HR捐贈者進入靶細胞
    使用共轉染質粒,共轉導為慢病毒,或共注射的mRNA。

     

    選擇/屏幕:選擇或篩選突變體并驗證。

    VALIDATE:基因型或序列推定的突變體,以驗證單個或雙等位基因轉化。

    在多個基因組位置同時進行編輯

    請注意,本研究使用略有不同的All-in-One Cas9 SmartNuclease質粒設計,但預期結果相似。

    圖2. Multiplex gRNA克隆試劑盒可以有效地提供四種gRNA。 (A)我們使用了使用Multilplex gRNA克隆試劑盒和All-in-one Cas9 SmartNickase載體創建的四重gRNA,以從具有穩定整合的CMV的細胞系中去除(B) 1260bp的GFP-T2A-RFP區段-GFP-T2A-RFP表達盒。我們將這四種gRNA克隆到Cas9 SmartNickase載體(EF1Nickase-H1-gRNA)中以指導兩個雙切口事件 - 一個在GFP的5'末端,另一個在RFP基因的3'末端。(C)使用僅在GFP和RFP基因外部的引物進行的PCR測定在不存在SmartNickase載體(泳道1)的情況下產生1600bp片段,并且在存在Cas9SmartNickase-4gRNA構建體(泳道2)的情況下產生340bp片段,證明SmartNickase介導的配對雙切口和GFP-T2A-RFP基因組缺失的效率。(D) GFP和RFP活性的缺失也可以在功能測定中看到,通過降低GFP和RFP熒光。

     

     

    上海起發實驗試劑有限公司是專業從事生物技術產品銷售的高科技企業,是國內生物試劑、儀器、消耗品領域的企業之一。起發公司自成立以來,連續2年高速成長。公司的發展目標是建成專業從事生物技術產品銷售、生產與開發的公司。 

     

    上海起發實驗試劑有限公司是實驗試劑一站式采購服務商

    1:強大的進口輻射能力,血清、抗體、耗材、大部分限制進口品等。

    2:產品種類齊全,經營超過700多個品牌,基本涵蓋所有生物實驗試劑耗材。

    3:提供加急服務,貨品一般1-2周到貨。

    4:富有競爭力的價格優勢,絕大部分價格有優勢。

    5:多年積累良好的信譽,大部分客戶提供貨到付款服務。客戶包括清華、北大、交大、復旦、中山等100多所高校,ROCHE,阿斯利康、國藥、fisher等藥企。

    6:我們還是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech;sysy,TriLink BioTechnologies,Inc;worthington-biochem,zyagen等幾十家國外公司授權代理。

    7:我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等*批發,歡迎合作。

     

    主站蜘蛛池模板: 日本高清免费网站| 在线精品免费视频无码的| 亚洲五月午夜免费在线视频| 波多野结衣一区二区免费视频| 国产成人无码区免费A∨视频网站 国产成人涩涩涩视频在线观看免费 | 亚洲无码黄色网址| 久久久国产精品无码免费专区| 国产美女亚洲精品久久久综合| 亚洲成a人片在线观| 亚洲精华液一二三产区| 久久国产乱子伦精品免费看| 亚洲中文字幕在线第六区| 国产v精品成人免费视频400条| 婷婷综合缴情亚洲狠狠尤物| 亚洲1区1区3区4区产品乱码芒果 | 亚洲AV无码一区二区三区鸳鸯影院| 亚洲综合色区中文字幕| 久久久精品午夜免费不卡| 高清国语自产拍免费视频国产| 久久精品视频亚洲| 国产成人亚洲综合a∨| 亚洲日本一区二区三区在线不卡| 日本最新免费网站| 在线观看亚洲精品国产| 免费h成人黄漫画嘿咻破解版| 日韩免费一区二区三区在线 | 另类小说亚洲色图| 亚洲精品亚洲人成在线观看麻豆 | 亚洲一区免费观看| 香蕉国产在线观看免费| 在线看片无码永久免费视频| 久久99精品视免费看| 中文字幕手机在线免费看电影| 亚洲高清国产拍精品青青草原| 国产午夜不卡AV免费| 亚洲三级在线免费观看| 亚洲国产日韩在线人成下载| 人成午夜免费大片在线观看| 亚洲中久无码永久在线观看同| 亚洲视频在线观看网站| 色噜噜狠狠色综合免费视频|