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上海起發為System Biosciences特約經銷商，System Biosciences,簡稱SBI，美國加州灣區新成立的生技公司，致力于*、創新生物技術之開發，以研發利于基因及蛋白質功能鑒定、研究之嶄新方法和工具為宗旨。 現階段研發重心為RNA干擾（RNAi）研究之相關工具。 System Biosciences (SBI) 致力于開發*、革新的技術，為客戶研究蛋白組學和基因組學功能提供研究工具。SBI 是專業的慢病毒產品公司，提供基于慢病毒的所有相關產品、質粒、試劑盒及相關配套試劑和慢病毒延伸產品如IPS細胞多功能性誘導試劑盒和RNAi篩選文庫。
SBI CAS720A-KIT說明書
品牌：System Biosciences
貨號：CAS720A-KIT
增強您的一體化Cas9 SmartNuclease質粒與多路復用gRNA傳遞
通過將CAG-T7-hspCas9-H1-gRNA一體化Cas9 SmartNuclease TM質粒與Multiplex gRNA克隆試劑盒相結合，輕松提高功能。總之，這兩種產品可以實現更廣泛的需要多種gRNA的復雜基因組編輯項目。
您可以獲得CAG-T7-hspCas9-H1-gRNA All-in-one Cas9 SmartNuclease質粒的所有優點：
結合Multiplex gRNA克隆試劑盒的優點：
正如我們所有的Cas9交付選項一樣，CAG-T7-hspCas9-H1-gRNA質粒在功能上得到了驗證，并得到了我們的專家團隊的支持 - 如果您有基因組工程問題，只需通過電子郵件tech @ systembio發送問。 com。
為什么建議使用人力資源定位向量
盡管單獨由Cas9引起的DSB可導致基因敲除，但SBI建議使用HR靶向載體（也稱為HR供體載體）以實現更有效和的突變。人力資源捐助者可以提供正面或負面選擇的要素，以確保更容易識別成功的突變事件。此外，HR供體可以包含高達6-8 kb的開放閱讀框用于基因敲入或標記，并且當5'或3'同源臂中包含小突變時，可以進行特定的靶向基因編輯。
使用此表格選擇適合您的CRISPR / Cas9產品：
對于此應用程序 | 使用這些產品 | |
修改生物 | 使用這些產品 | 使用這些產品 |
·基因標記 ·轉基因生物的產生 ·模型生物工程 | 創造轉基因動物 | ·注射Cas9 mRNA＆ ·gRNA合成試劑盒 ·純化的Cas9蛋白 |
動物模型中的體內基因組編輯 | ·AAV-Cas9載體 ·純化的Cas9蛋白 | |
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修改細胞系 |
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·穩定的KO，KI和基因組 ·編輯體細胞 ·轉基因細胞系的生成 ·基于細胞的疾病模型 | 可轉染的細胞 | ·Cas9質粒 ·純化的Cas9蛋白 |
·AAV-Cas9 Vect難以轉染細胞系， ·主要細胞 ·造血細胞 ·干細胞 ·Lenti-Cas9系統 | ·AAV-Cas9載體 ·Lenti-Cas9系統 | |
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篩選 |
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·全基因組調查 ·gRNA庫屏幕 ·功能屏幕 | 所有應用都需要 穩定的Cas9過表達 | ·Lenti-Cas9系統 ·AAVS1安全港Cas9 ·敲入系統 ·純化的Cas9蛋白 |
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臨床前應用 |
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·非目標事件是受關注的問題 | 所有應用 | ·Cas9切割片，提供所有交付格式 ·純化的Cas9蛋白 |
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多變量同時工程 |
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| 所有應用 | ·多重gRNA克隆試劑盒，兼容所有Cas9遞送選項 |
使用SBI的一體化Cas9 SmartNuclease質粒和Mulitplex gRNA克隆試劑盒
工作流程一目了然
圖1. Multiplex gRNA克隆試劑盒工作流程。
使用Multiplex gRNA克隆試劑盒準備您的多重gRNA插入片段（圖1）
PrecisionX Multiplex gRNA克隆試劑盒提供H1和U6啟動子區域，可輕松構建多個gRNA盒（圖1）。在步驟1中，將含有所需gRNA（由用戶設計）和腳手架 - 啟動子區段（來自試劑盒）的重疊末端的引物在PCR反應中合并以產生含有兩種gRNA的PCR擴增子。在步驟2中，將PCR擴增子與融合反應混合物一起與用于無縫構建的線性化表達載體組合。
用CRISPR / Cas9進行基因組工程
有關使用CRISPR / Cas9技術進行基因組工程的一般指導，請查看我們的CRISPR / Cas9教程以及以下應用筆記：
CRISPR / Cas9基因敲除應用簡報（PDF）»
CRISPR / Cas9基因編輯應用簡報（PDF）»
CRISPR / Cas9基因標簽應用簡報（PDF）»
CRISPR / Cas9基礎
通過仔細選擇靶序列和設計供體質粒進行同源
重組，您可以使用CRISPR / Cas9實現且高度靶向的基因組修飾。
系統
Cas9蛋白質 - 指導RNA（gRNA）指導位點特異性雙鏈DNA切割，與目標DNA中的原型銜接子基序（PAM）相鄰。
引導Cas9切割靶基因組中的同源區域的gRNA- RNA序列。僅當gRNA同源性與PAM相鄰時才有效切割。
PAM- prototospacer銜接子基序NGG是目標DNA序列，如果指向gRNA，spCas9將從上游切除。
工作流程一目了然
設計：選擇gRNA和HR供體質粒。選擇gRNA位點并設計供
體質粒決定同源重組事件是否導致敲除，
敲入，編輯或標記。
構建：將gRNA克隆到一體化Cas9載體中。將5'和3'同源臂克隆到HR
供體質粒中。如果創建基因敲入，將所需基因克隆到HR供體中。
共轉染或CO-INJECT：介紹Cas9，gRNA和HR捐贈者進入靶細胞
使用共轉染質粒，共轉導為慢病毒，或共注射的mRNA。
選擇/屏幕：選擇或篩選突變體并驗證。
VALIDATE：基因型或序列推定的突變體，以驗證單個或雙等位基因轉化。
在多個基因組位置同時進行編輯
請注意，本研究使用略有不同的All-in-One Cas9 SmartNuclease質粒設計，但預期結果相似。
圖2. Multiplex gRNA克隆試劑盒可以有效地提供四種gRNA。 （A）我們使用了使用Multilplex gRNA克隆試劑盒和All-in-one Cas9 SmartNickase載體創建的四重gRNA，以從具有穩定整合的CMV的細胞系中去除（B） 1260bp的GFP-T2A-RFP區段-GFP-T2A-RFP表達盒。我們將這四種gRNA克隆到Cas9 SmartNickase載體（EF1Nickase-H1-gRNA）中以指導兩個雙切口事件 - 一個在GFP的5'末端，另一個在RFP基因的3'末端。（C）使用僅在GFP和RFP基因外部的引物進行的PCR測定在不存在SmartNickase載體（泳道1）的情況下產生1600bp片段，并且在存在Cas9SmartNickase-4gRNA構建體（泳道2）的情況下產生340bp片段，證明SmartNickase介導的配對雙切口和GFP-T2A-RFP基因組缺失的效率。（D） GFP和RFP活性的缺失也可以在功能測定中看到，通過降低GFP和RFP熒光。
上海起發實驗試劑有限公司是專業從事生物技術產品銷售的高科技企業，是國內生物試劑、儀器、消耗品領域的企業之一。起發公司自成立以來，連續2年高速成長。公司的發展目標是建成專業從事生物技術產品銷售、生產與開發的公司。
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