Taq DNA聚合酶

Molecular Cloning Laboratories（MCLAB）成立于1998年，是為生命科學(xué)界提供基因組研究耗材和服務(wù)的先進(jìn)者。

MCLAB提供具有成本效益的消耗品和試劑，專注于代以及新一代測(cè)序和DNA段分析。我們提供大量分子生物學(xué)相關(guān)產(chǎn)品，包括抗體，生化試劑，克隆試劑盒，酶，PCR試劑盒，蛋白質(zhì)凝膠和溶液等。作為我們自己的制造商，我們可以控制生產(chǎn)流程，并大限度地減少定制和大規(guī)模訂單的延遲。它有助于確保我們的客戶獲得高質(zhì)量和價(jià)值。

MCLAB擁有一支由20 多位經(jīng)驗(yàn)豐富的科學(xué)家組成的團(tuán)隊(duì)，致力于為研究人員提供的服務(wù)。我們專注于基因組學(xué)領(lǐng)域，擁有DNA測(cè)序，發(fā)酵，片段分析，分子克隆，過(guò)表達(dá)，蛋白質(zhì)純化和蛋白質(zhì)合成方面的專家。我們采用量身定制的客戶服務(wù)方式，讓您有機(jī)會(huì)定制您的項(xiàng)目，并直接與我們的科學(xué)家團(tuán)隊(duì)交流以獲得技術(shù)支持。憑借二十多年的經(jīng)驗(yàn)，我們才華橫溢，技術(shù)的員工致力于為您提供所需的成果。

Taq DNA聚合酶

Taq DNA聚合酶（常規(guī)）是一種熱穩(wěn)定酶，具有高度持續(xù)的5' - > 3'聚合酶活性和5' - > 3'外切核酸酶活性。

描述：
Taq DNA聚合酶（常規(guī)）是一種熱穩(wěn)定酶，具有高度持續(xù)的5' - > 3'聚合酶活性和5' - > 3'外切核酸酶活性。該酶從大腸桿菌中純化，由分子量為94kDa的單一多肽組成。Taq DNA聚合酶在dNTP和引物的存在下從單鏈模板合成DNA。

應(yīng)用：
- PCR（普通和高通量）
- 引物延伸
- 微陣列分析
- 變性液相色譜（DHPLC）

來(lái)源：攜帶來(lái)自嗜熱生物體的Taq DNA聚合酶基因的
重組大腸桿菌菌株Thermus Aquaticus YT-1。

供應(yīng)：
10x Taq PCR緩沖液（無(wú)dNTP）

供應(yīng)：
20 mM Tris-HCl 
100 mM NaCl 
1.0 mM DTT 
0.1 mM EDTA 
50％甘油
pH 7.5 @ 25°C 

單位定義：
1單位定義為酶的量將在75℃下在30分鐘內(nèi)將10nmol的dNTP摻入酸不溶性材料中。

PCR指南：
Taq DNA聚合酶是初和常用的PCR酶。Taq酶擅長(zhǎng)于從低復(fù)雜性模板來(lái)源擴(kuò)增較短（<5kb）的序列，并且在很少或沒(méi)有優(yōu)化反應(yīng)條件的情況下產(chǎn)生穩(wěn)健的產(chǎn)率。在使用Taq DSC 2.0 DNA聚合酶設(shè)計(jì)PCR策略時(shí)，請(qǐng)考慮以下指南。

1. DNA模板：盡管通常不需要對(duì)PCR模板進(jìn)行大量純化，但應(yīng)注意粗制或部分純化的DNA來(lái)源，因?yàn)樘幚砗突瘜W(xué)試劑會(huì)對(duì)PCR過(guò)程產(chǎn)生不利影響。應(yīng)避免接觸短波紫外線或其他DNA損傷劑，高離子強(qiáng)度，SDS，加載染料和苯酚等清潔劑也應(yīng)避免接觸。為了防止以前的PCR反應(yīng)造成污染，請(qǐng)考慮在正壓罩和氣溶膠屏障吸管設(shè)置反應(yīng)。在典型的25個(gè)循環(huán)PCR中，104個(gè)拷貝的靶序列將產(chǎn)生可重復(fù)的擴(kuò)增產(chǎn)物。這相當(dāng)于大約0.1-1ng / ml（終濃度）的質(zhì)粒DNA和1-10μg/ ml的基因組DNA。使用較低的DNA濃度通常會(huì)產(chǎn)生較少的非特異性產(chǎn)物，

2.引物設(shè)計(jì)：理想地，寡核苷酸引物長(zhǎng)度為15-30個(gè)堿基，接近50％G + C，并具有相等的（+/- 3℃）退火溫度。建議使用軟件來(lái)檢測(cè)自身互補(bǔ)或發(fā)夾易發(fā)區(qū)域，并由一些綜合提供商提供服務(wù)。注意，雖然引物的5'末端可能包含未模板序列，但3'末端必須*匹配。反應(yīng)中典型的寡核苷酸濃度為0.1-0.5μM。

3.鎂：鎂是PCR反應(yīng)的關(guān)鍵組成部分，盡管其濃度可以調(diào)節(jié)以促進(jìn)各種效應(yīng)。通常，1.5-2.0mM Mg ²⁺靶向，但更高的濃度（高達(dá)5mM）可用于以保真度為代價(jià)刺激反應(yīng)的產(chǎn)率。相反的情況也是如此 - 較低的鎂濃度將促進(jìn)更高保真度的產(chǎn)品，總體擴(kuò)增產(chǎn)率更低。注意，某些反應(yīng)組分，特別是模板DNA和寡核苷酸，可能為反應(yīng)提供螯合劑，這會(huì)降低有效的鎂濃度并使反應(yīng)餓死。

4. dNTP：通常，使用100-200μMdNTP的終濃度，盡管更高的濃度可以刺激產(chǎn)量（特別是對(duì)于更長(zhǎng)的靶標(biāo)），并且更低的濃度可以提供保真度的增加。Taq酶DSC 2.0 DNA聚合酶還可以摻入和讀取脫氧尿苷和肌苷，這兩種類似物在某些應(yīng)用中使用。

5. Taq DSC 2.0聚合酶：典型的是1單位/50μL反應(yīng)（20U / mL），但可以添加額外的酶以刺激產(chǎn)率。Taq DSC 2.0 DNA聚合酶以大約1-2000個(gè)核苷酸/分鐘擴(kuò)展DNA模板，因此建議每個(gè)循環(huán)每個(gè)kb提供30-60秒的延伸時(shí)間。適當(dāng)?shù)难由鞙囟确秶鸀?8-72°C。因?yàn)?/span>Taq DSC 2.0 DNA聚合酶利用DNA聚合酶對(duì)雙鏈DNA段的天然親和力來(lái)促進(jìn)其熱啟動(dòng)功能，所以它不需要廣泛的初始變性步驟來(lái)激活聚合酶。

典型的50μl反應(yīng)：
在冰上，準(zhǔn)備以下每種主混合物，合并，并置于加熱（至94°C）的熱循環(huán)儀中。

2X DNA /寡核苷酸主混合物：
1.0μL10毫摩爾dNTP 
1.0μL10μM正向引物
1.0μL10μM反向引物
1.0μL500納克/微升基因組DNA 
21μlI型水

2X酶/緩沖液預(yù)混：
5.0μl10X 的Taq PCR緩沖液  
0.2μL5 U /微升的Taq DSC 2.0 DNA聚合酶
19.8μlI型水

建議保存條件： -20℃

部分產(chǎn)品：

上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司是實(shí)驗(yàn)試劑一站式采購(gòu)服務(wù)商

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