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    cytoskeleton AD99-B說明書

     更新時間:2018-08-17 點擊量:1741

    Cytoskeleton,Inc。很高興為藥物篩選,信號轉導和細胞骨架研究提供廣泛的試劑盒和產品。我們專注于生產純化蛋白質和易于使用的試劑盒,以研究生物化學和細胞過程。我們的試劑盒可用于少量樣品,用于基礎研究或小屏幕(Biochem Kits™),也可用于大屏幕的高通量樣品CytoDYNAMIX Screens™)。

    除了我們現有的產品,我們還在產品線中為微管,微管蛋白,運動蛋白,小G蛋白效應物,GAP,GEF和其他幾種蛋白提供藥物篩選服務。

     

    Binding Proteins

    結合蛋白質

    · 概述

    · 關于

    · CITATIONS

    · 常見問題解答

     

    測定所有肌動蛋白結合蛋白(ABP)以確保其活性與公布的值相當。測定因產品而異,包括F-肌動蛋白切斷測定,F-肌動蛋白激活的ATP水解和肌動蛋白聚合測定。顯示了測量WASP VCA結構域蛋白在肌動蛋白聚合中的作用(右)。

     

    Cytoskeleton,Inc。銷售一系列純化的肌動蛋白結合蛋白。所有Cytoskeleton的肌動蛋白結合蛋白都具有高純度,并經過嚴格的生物活性測試。細胞骨架還為肌動蛋白結合蛋白研究提供肌動蛋白,抗體和試劑盒。

    由Arp2 / 3和WASP VCA結構域刺激的肌動蛋白聚合。試劑盒BK003用于研究Arp2 / 3(Cat。#RP01)和WASP VCA(Cat。#VCG03)結構域對肌動蛋白聚合的影響

    肌動蛋白與細胞中的多種蛋白質相互作用
    *,F-和G-肌動蛋白與細胞中的多種蛋白質相互作用(14)??。目前有超過150種已知的肌動蛋白結合蛋白(ABP),其占細胞蛋白的約25%。ABP在肌動蛋白細胞骨架上賦予大量功能多樣性,其涉及諸如肌肉收縮,唇形突破,細胞運動,胞質分裂和細胞質流動的過程。研究這些過程如何調節肌動蛋白絲功能和動力學是一個重要且不斷增長的研究領域。

    可以通過使用生物化學,遺傳學和免疫學方法分離和研究肌動蛋白結合蛋白。因為存在超過50種類型的肌動蛋白結合蛋白,所以用于鑒定它們的方法及其功能/活性也是多種多樣的。肌動蛋白親和柱通常用于親和純化ABP,無論它們是F-或G-肌動蛋白結合。可以通過利用芘肌動蛋白熒光的聚合增強來進行顯示潛在ABP影響肌動蛋白動力學的簡單測定(參見測量肌動蛋白聚合物部分)。這種性質的研究有助于鑒定新的肌動蛋白結合蛋白。有幾篇值得一讀的關于識別和量化新肌動蛋白結合蛋白的可能方法的評論(15,16,17)?

    問題1:哪種肌動蛋白結合蛋白(ABP)可用作F-肌動蛋白結合對照? 

    答案1:肌動蛋白結合蛋白α-輔肌動蛋白(Cat。#AT01)是一種F-肌動蛋白結合和交聯蛋白,使其可用作F-肌動蛋白結合研究的對照。它的Kd是1μM,這意味著在該濃度下發生50%結合。因此,我們的目標是使用 2μM的α-肌動蛋白作為結合測定中的陽性對照。在結合反應中,2μM濃度的α-輔肌動蛋白相當于0.23μg/μl。此外,α-輔肌動蛋白對pH敏感,其高親和力發生在pH 7.0。

     

    問題2:Cytoskeleton的肌球蛋白或重的meromyosin是否具有F-肌動蛋白活力? 

    答案2:遺憾的是,我們不會出售運動級肌球蛋白或重肌紅蛋白用于肌動蛋白運動試驗。我們發現質量控制測試非常難以復制,因此我們無法充分確保試劑的質量。因此,肌球蛋白(Cat。#MY02MY03)和重型meromyosin蛋白(Cat。#MH01)不推薦用于F-肌動蛋白運動測定。已經測試過這些試劑的客戶在運動方面沒有取得很好的成功,因此我們不建議購買樣品進行測試。如果需要運動級肌動蛋白或重型meromyosin,我們建議遵循原始方案(Kron和Spudich,1985)并在液氮中冷凍100μl等分試樣以確保穩定性。

        參考文獻:  SJ Kron和JA Spudich,1985年。熒光肌動蛋白絲在固定在玻璃表面的肌球蛋白上移動。PNAS,83,6272-6276。

     

    肌動蛋白(純度> 99%):牛心肌

    1x1毫克(Cat。#AD99-A)

    5x1毫克(Cat。#AD99-B)

    產品用途包括

    · 鑒定和表征心肌肌動蛋白結合蛋白

    · 體外心肌肌動蛋白聚合研究

     

    材料:
    牛心肌肌動蛋白作為凍干粉末提供。當一個小瓶在1ml肌動蛋白單體緩沖液復原:5.0毫摩爾Tris-HCl pH 8.0中,0.2毫米氯化鈣2,0.2mM的ATP和0.5mM DTT,它是在1.0毫克/毫升的終濃度。

    純度:
    通過在SDS-PAGE凝膠上掃描蛋白質的光密度測定來確定純度。樣品純度> 99%。

    生物活性:
    生物活性以三種方式確定。種方法利用芘肌肉肌動蛋白作為聚合的熒光指示劑(使用1:10比例的AP05至AD99)。第二種是通過高速離心沉淀肌動蛋白聚合物。第三種方法通過特異性抑制DNase活性來測量單體的完整性。生物活性> 90%。

    問題1:牛心肌肌肉肌動蛋白的同種型組成是什么?

    答案1:  牛心肌肌動蛋白(Cat。#AD99)由84%的α-心肌細胞和16%的α-骨骼肌動蛋白同種型組成。

     

    問題2:當心肌肌動蛋白沒有可用的芘結合物時,如何用芘測定法測量肌動蛋白聚合? 

    答案2:  為了檢查未標記的心肌肌動蛋白(Cat。#AD99)的聚合,請點擊此處查看使用過量未標記[心肌]肌動蛋白加10%芘標記的骨骼肌肌動蛋白的聚合方案。芘肌肉肌動蛋白本身不會以該測定中使用的濃度聚合,因此該反應依賴于未標記的心肌肌動蛋白(Cat。#AD99)用于F-肌動蛋白形成。以這種方式,芘標記的肌肉肌動蛋白被吸收并聚合以充當用于聚合未標記的肌動蛋白的報道分子,其以更高的濃度存在。

    Butler SC,et al。海藻中的pectenotoxins對各種肌動蛋白異構體聚合的抑制作用。毒理學。體外。26,493-499。

    Fressinaud C.,et al。軸突細胞骨架蛋白在體外特異性調節少突膠質細胞的生長和分化。神經化學雜志。詮釋。60,78-90。

    Orlova A.,et al。肌球蛋白結合蛋白C的N-末端結構域可以多態性結合F-肌動蛋白。J. Mol。細胞。412,379-386。

    Debold EP,et al。與增生性和擴張性心肌病相關的人肌動蛋白突變在體外表現出明顯的細絲調節特性。J. Mol。細胞。心肺。48,286-292。

    Passarelli C.,et al。分離的肌原纖維對體外谷胱甘肽化的易感性:對肌肉功能的潛在相關性。細胞骨架。67,81-89。

     

     

     

     

    貨號

    品名

    規格

    品牌

    BK165-S

    Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit

    (10 assay)

    cytoskeleton

    BK165

    Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit

    (30 assay)

    cytoskeleton

    BK163-S

    Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit

    (10 assay)

    cytoskeleton

    BK163

    Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit

    (30 assay)

    cytoskeleton

    BK160-S

    Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit

    (10 assay)

    cytoskeleton

    BK160

    Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit

    (30 assay)

    cytoskeleton

    BK162-S

    Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit

    (10 assay)

    cytoskeleton

    BK162

    Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit

    (30 assay)

    cytoskeleton

    BK161-S

    Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit

    (10 assay)

    cytoskeleton

    BK161

    Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit

    (30 assay)

    cytoskeleton

    AAC04-Beads

    Acetyl-Lysine Affinity Beads

    ea

    cytoskeleton

    APY03-Beads

    Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads

    ea

    cytoskeleton

    ASM11-Beads

    SUMOylation 1 Affinity Beads

    ea

    cytoskeleton

    ASM24-Beads

    SUMOylation 2/3 Affinity Beads

    ea

    cytoskeleton

    UBA01-Beads

    Ubiquitination Affinity Beads

    ea

    cytoskeleton

    CIG02-Beads

    Acetyl-Lysine Control Beads

    ea

    cytoskeleton

    CIG03-Beads

    SUMO1 IP Control Beads

    ea

    cytoskeleton

    CIG01-Beads

    IgG Control Beads

    ea

    cytoskeleton

    CUB02-Beads

    Ubiquitination Control Beads

    ea

    cytoskeleton

    BLR01

    BlastR™ Rapid Lysate Prep Kit

    ea

    cytoskeleton

    BLR02

    BlastR™ Rapid Filtration Kit

    ea

    cytoskeleton

    AAC02

    Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (7B1)

    ea

    cytoskeleton

    AAC03

    Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)

    ea

    cytoskeleton

    AAC03-HRP

    Acetyl Lysine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)

    ea

    cytoskeleton

    AAC01

    Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (3C6.08.20)

    ea

    cytoskeleton

    APY03

    Phosphotyrosine Antibody Mouse Monoclonal (27B10)

    ea

    cytoskeleton

    APY03-HRP

    Phosphotyrosine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (27B10)

    ea

    cytoskeleton

    ASM01

    SUMO1 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 5D8B16)

    ea

    cytoskeleton

    ASM24

    SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 11G2)

    ea

    cytoskeleton

    ASM23

    SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)

    ea

    cytoskeleton

    ASM23-HRP

    SUMO-2/3-HRP Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)

    ea

    cytoskeleton

    AUB01

    Ubiquitin Antibody Mouse Monoclonal

    ea

    cytoskeleton

    AUB01-HRP

    Ubiquitin-HRP Antibody Mouse Monoclonal

    ea

    cytoskeleton

    PHDG1

    Acti-stain 488 phalloidin

    ea

    cytoskeleton

    PHDH1

    Acti-stain 555 phalloidin

    ea

    cytoskeleton

    PHDN1

    Acti-stain 670 phalloidin

    ea

    cytoskeleton

    BK001

    Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin

    ea

    cytoskeleton

    BK003

    Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin

    ea

    cytoskeleton

    AKL95

    Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle

    ea

    cytoskeleton

    AD99

    Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle

    ea

    cytoskeleton

    AS99

    Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle

    ea

    cytoskeleton

    AKL99

    Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle

    ea

    cytoskeleton

    AKF99

    Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle

    ea

    cytoskeleton

    AP05

    Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle

    ea

    cytoskeleton

    APHR

    Actin protein (rhodamine): human platelet

    ea

    cytoskeleton

    AR05

    Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle

    ea

    cytoskeleton

    AT01

    Alpha-actinin protein: rabbit skeletal muscle

    ea

    cytoskeleton

    RP01P

    Arp2/3 protein complex: porcine brain

    ea

    cytoskeleton

    CS-TFC01

    Cardiac Thin Filament Complex (CTFC)

    ea

    cytoskeleton

    CF01

    Cofilin 1 protein: human recombinant

    ea

    cytoskeleton

    HPG6

    Gelsolin protein: Homo sapiens recombinant

    ea

    cytoskeleton

    MH01

    Heavy meromyosin protein

    ea

    cytoskeleton

    CS-MH03

    Heavy Meromyosin Protein (HMM Fragment)

    ea

    cytoskeleton

    CS-MYS03

    Myosin - cardiac S1 fragment

    ea

    cytoskeleton

    CS-MYS04

    Myosin - skeletal muscle S1 fragment

    ea

    cytoskeleton

    CS-MYS05

    Myosin - smooth muscle S1 fragment

    ea

    cytoskeleton

    MY02

    Myosin II protein: rabbit skeletal muscle

    ea

    cytoskeleton

    MY03

    Myosin protein: bovine cardiac muscle

    ea

    cytoskeleton

    PR02

    Profilin 1 protein: Untagged, human recombinant

    ea

    cytoskeleton

    PHDR1

    Rhodamine Phalloidin

    ea

    cytoskeleton

    CY-SC001

    SiR-Actin Kit

    ea

    cytoskeleton

    CY-SC013

    SiR700-Actin Kit

    ea

    cytoskeleton

    VCG03

    WASP protein VCA domain: GST tagged: human

    ea

    cytoskeleton

     

     

     

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