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    immuquest IQ580說明書

     更新時間:2019-02-28 點擊量:1752

    immuquest IQ580說明書

    橋粒芯蛋白2抗體[7H9]

    使用橋粒芯蛋白2抗體[7H9]在A431細胞裂解物上進行Western印跡

    目錄號:IQ580

    £226.00

     

    目標抗原

    Desmoglein 2

     

    主要說明

    小鼠抗橋粒芯糖蛋白2 [7H9]

     

    目錄編號

    IQ580

     

    數量

    0.1毫升

     

    濃度

    1mg / ml的

     

    克隆

    7H9

     

    主辦

    老鼠

     

    同型

    的IgG1

     

    免疫原

    人橋粒芯糖蛋白-2的氨基酸37-164與GST融合

     

    骨髓瘤/融合伴侶

    NS1骨髓瘤

     

    物種反應性

    人的

     

    純化

    蛋白A親和色譜

     

    格式

    純化的抗體含有PBS + 0.1%疊氮化NA

     

    應用

    WB,ICC / IF

     

    稀釋液

    宜抗體稀釋應通過滴定確定,但作為指導起點

    WB 1:100 160 kDa波段(特別識別橋粒芯糖蛋白-2的前體區域)

     

    參考

    Keim,S。等。人。針對人橋粒芯糖蛋白-2前體的單克隆抗體的產生和表征。雜交瘤卷 27號:249-258(2008)PUBMED

     

    數據庫鏈接

    Entrez基因:1829  人類

    Entrez Gene:13511  鼠標

    Omim:125671  人類

    SwissProt:Q14126  人類

    SwissProt:O55111  鼠標

    Unigene:412597  人類

    Unigene:345891  鼠標

     

    也稱為

    ARVC 10抗體; ARVC10抗體; ARVD 10抗體; ARVD10抗體; Cadherin家族成員5抗體; CDHF 5抗體; CDHF5抗體; CMD1BB抗體; Desmoglein 2抗體

     

    本產品僅供研究使用。不用于治療或診斷用途。

     

    細胞間橋粒連接的組成部分。參與斑塊蛋白和介導細胞 - 細胞粘附的中間絲的相互作用

     

    免疫熒光方案 - 甲醛固定

       1.從Tcunit收集細胞,并用吸力從培養皿中取出培養基。
       2.用1x PBS洗滌并取出。
       3.在室溫下在軌道振蕩器上將細胞在預熱(37℃)對甲醛中孵育12分鐘。
       4.去除PFA并在室溫下在1x PBS中的0.5%Triton X-100中孵育5分鐘。
       5.準備封閉試劑,這也是抗體稀釋劑。
       6.在室溫下用1x PBS洗滌細胞2次,在軌道振蕩器上洗滌4分鐘/洗滌。
       7.在室溫下用1%NCS和1x PBS封閉30分鐘。
       8.準備一抗(50μl/蓋玻片)和濕潤染色室。
       9.在室溫下用1x PBS洗滌細胞2次并短暫風干。
      10.在室溫下在黑暗的染色室中與一抗孵育1小時。在此期間準備二抗。
      11.用1x PBS洗滌細胞5次(每個燒杯更換5個燒杯/ 5個計數)
      12。在室溫下在黑暗的染色室中與第二抗體孵育1小時。
      13.用1x PBS洗滌細胞5次。
      14.登上達皮。

    溶液(染色當天新鮮制備)。

        * 1x磷酸鹽緩沖鹽水。
        *封閉試劑:1x PBS中1%NCS(使用新鮮的10x PBS)。
        *固定液:3.5%對甲醛。

    1.75g PFA在20ml d.H2O中加5滴1M NaOH。在50-60℃的熱板上攪拌直至溶解。加入4滴IN HCl并檢查pH指示條。PH值應為7.4。完成體積,d.H20至25ml,加入25ml 2xPBS。在添加到蓋玻片之前檢查pH值。


    免疫熒光方案 - 甲醇/丙酮固定

       1.從TCunit收集細胞,并用吸力從培養皿中取出培養基。
       2.用1x PBS洗滌并取出。
       3.用冷甲醇:丙酮1:1在冰上固定細胞10分鐘。
       4.制備阻斷試劑,這也是抗體的稀釋劑。
       5.取出固定劑并在室溫下用1x PBS洗滌細胞3次,在軌道振蕩器上洗滌4分鐘。
       6.在室溫下用1%NCS和1x PBS封閉30分鐘。
       7.準備一抗(50?l /蓋玻片)和濕染色室。
       8.在室溫下用1x PBS洗滌細胞2次并風干約7分鐘。
       9.在室溫下在室溫下與一抗孵育1小時,在染色室中避光。在此期間準備二抗。
      10.用1x PBS洗滌細胞5次(每個燒杯更換5次燒杯/ 5次計數)
      11。在室溫下,在染色室的黑暗中與第二抗體孵育1小時。
      12.用1x PBS洗滌細胞5次。
      13.登上達皮。

    溶液(染色當天新鮮制備)

        * 1x磷酸鹽緩沖鹽水。
        *封閉試劑:1x PBS中1%NCS(使用新鮮的10x PBS)。
        *固定液:甲醇:丙酮1:1冰冷。



    Western Blotting Protocol

       1.將凝膠轉移到PDVF或硝酸纖維素膜上
       2.將膜置于封閉緩沖液中的塑料托盤中攪拌1小時
       3.在洗滌緩沖液中沖洗
       4.在洗滌緩沖液和一抗中孵育1小時
       5.洗滌6次X用洗滌緩沖液洗滌5分鐘
       6.在洗滌緩沖液和二抗中孵育1小時
       7.用洗滌緩沖液洗滌6X 5分鐘
       8.檢測(例如ECL,Amersham根據制造商的說明)

    洗滌緩沖液
    PBS + 0.1%Tween 20 

    阻斷緩沖液
    洗滌緩沖液+ 5%奶粉

    所用抗體的濃度取決于每種抗體,抗原的量和所用的檢測方法。通常,稀釋在稀釋的幾百倍稀釋到幾千倍的范圍內,但通常必須憑經驗確定。

     

     

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