laebio K007說明書

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Sumoylation Control Kits 
Catalog # K007 supplied with proteins

描述：
該檢測試劑盒含有用于常規檢測SUMO化活性的試劑。包括Sumoylation標記（人拓撲異構酶I蛋白）以允許清楚地檢測反應。已經證明該測定法適用于粗提物。強烈建議將人類EI，活性物質（Cat＃P001; P006），人類E II，活性物質（Cat＃P002; P011）和人類SUMO I，活性物質（Cat＃P003; P012）與此試劑盒一起使用。

K007套件包含：

• SAE I和SAE II（人類EI）（Cat＃P006）
• UBC9（人類E II）（Cat＃P011）
• SUMO I（活動形式）。（Cat＃P012）
• 人DNA拓撲異構酶I片段。（Cat＃B007）
• 抗拓撲異構酶I抗體。（Cat＃AP006）（凍干的抗體應在使用前用100ul H ₂ O 重構。）
• 10X的SUMO化反應緩沖液。（Cat＃B006）（10x緩沖液含有200mM Hepes pH 7.5,50mM MgCl ₂和20mM ATP。）

上述試劑適用于50次SUMO化反應。

測定條件：
SUMO化測定在20微升的終體積中含有20mM的Hepes pH為7.5，5mM的氯化鎂反應緩沖液中進行₂，2mM的ATP。我們建議添加新鮮的2mM ATP以確保提供足夠的能量。

拓撲異構酶I Sumoylation Control Protocol：

1. 加入2ul 50kd拓撲異構酶I片段（Cat＃B007）作為每個反應的底物。
2. 在每個反應中，首先向底物中加入2ul E2，然后加入2ul Sumo-1,2ul 10x反應緩沖液（Cat＃B006），2ul E1和2μl20mMATP。后，加入H ₂ O使總體積達到20μl 。
3. LAE SUMO化蛋白的宜反應濃度如下：
   • EI：7.5ug / ml
   • E II：50ug / ml
   • SUMO-1：50ug / ml
         為對照測定的推薦條件是37 ^ø 30?60分鐘c。。
    
4. 在10 ml（Cat＃AP006）中使用1000倍稀釋的提供的拓撲異構酶I抗體進行免疫印跡。應檢測四個主要的sumoylated波段。

使用Topo-1抗體（cat＃AP006）的SUMO化 50Kd Topo-1蛋白（cat＃B007）的Western印跡（12.5％凝膠）。泳道1：sumoylated 50Kd Topo-I片段; 泳道2：未經過酰化的50Kd Topo-I片段。

Topo-1抗體（ Cat＃AP006）可檢測至少四個主要的SUMO化Topo-1片段 。

Sumoylation Protocol：

1. 準備合適的純化底物蛋白。
2. 在每個反應中，首先向底物中加入2μlE2，然后加入2μlSy,2μl10μl反應緩沖液，2μlE1和2μl20mMATP。后，加入H ₂ O使終體積達到20μl。
3. LAE蛋白的宜反應濃度如下：
   • EI：7.5ug / ml
   • E II：50ug / ml
   • SUMO-1：50ug / ml

運輸/儲存：
此套件隨附干冰，應儲存在-70 ^o C或更低溫度。  

法律考慮：僅供研究使用。

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Sumoylation Control Kits 
Catalog # K007 supplied with proteins

描述：
該檢測試劑盒含有用于常規檢測SUMO化活性的試劑。包括Sumoylation標記（人拓撲異構酶I蛋白）以允許清楚地檢測反應。已經證明該測定法適用于粗提物。強烈建議將人類EI，活性物質（Cat＃P001; P006），人類E II，活性物質（Cat＃P002; P011）和人類SUMO I，活性物質（Cat＃P003; P012）與此試劑盒一起使用。

K007套件包含：

• SAE I和SAE II（人類EI）（Cat＃P006）
• UBC9（人類E II）（Cat＃P011）
• SUMO I（活動形式）。（Cat＃P012）
• 人DNA拓撲異構酶I片段。（Cat＃B007）
• 抗拓撲異構酶I抗體。（Cat＃AP006）（凍干的抗體應在使用前用100ul H ₂ O 重構。）
• 10X的SUMO化反應緩沖液。（Cat＃B006）（10x緩沖液含有200mM Hepes pH 7.5,50mM MgCl ₂和20mM ATP。）

上述試劑適用于50次SUMO化反應。

測定條件：
SUMO化測定在20微升的終體積中含有20mM的Hepes pH為7.5，5mM的氯化鎂反應緩沖液中進行₂，2mM的ATP。我們建議添加新鮮的2mM ATP以確保提供足夠的能量。

拓撲異構酶I Sumoylation Control Protocol：

1. 加入2ul 50kd拓撲異構酶I片段（Cat＃B007）作為每個反應的底物。
2. 在每個反應中，首先向底物中加入2ul E2，然后加入2ul Sumo-1,2ul 10x反應緩沖液（Cat＃B006），2ul E1和2μl20mMATP。后，加入H ₂ O使總體積達到20μl 。
3. LAE SUMO化蛋白的宜反應濃度如下：
   • EI：7.5ug / ml
   • E II：50ug / ml
   • SUMO-1：50ug / ml
         為對照測定的推薦條件是37 ^ø 30?60分鐘c。。
    
4. 在10 ml（Cat＃AP006）中使用1000倍稀釋的提供的拓撲異構酶I抗體進行免疫印跡。應檢測四個主要的sumoylated波段。

使用Topo-1抗體（cat＃AP006）的SUMO化 50Kd Topo-1蛋白（cat＃B007）的Western印跡（12.5％凝膠）。泳道1：sumoylated 50Kd Topo-I片段; 泳道2：未經過酰化的50Kd Topo-I片段。

Topo-1抗體（ Cat＃AP006）可檢測至少四個主要的SUMO化Topo-1片段 。

Sumoylation Protocol：

1. 準備合適的純化底物蛋白。
2. 在每個反應中，首先向底物中加入2μlE2，然后加入2μlSy,2μl10μl反應緩沖液，2μlE1和2μl20mMATP。后，加入H ₂ O使終體積達到20μl。
3. LAE蛋白的宜反應濃度如下：
   • EI：7.5ug / ml
   • E II：50ug / ml
   • SUMO-1：50ug / ml

運輸/儲存：
此套件隨附干冰，應儲存在-70 ^o C或更低溫度。  

法律考慮：僅供研究使用。