ScienTech KTS-01說明書

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ScienTech KTS-01說明書

PAP (Pyrophosphorolysis-activated polymerization)/ KlenTaq-S

PAP（焦磷酸解 -活化聚合）/ KlenTaq -S

PAP是一種*的DNA擴增方法（Liu和Sommer：BioTechniques，29 [2000]，1072-1080; Nucleic Acids Res，30 [2002]，598-604），其中焦磷酸解 和聚合通過DNA聚合酶使用3連續(xù)偶聯(lián)。 '封閉的底漆。  焦磷酸解是DNA聚合的逆反應，其中在無機焦磷酸鹽存在下酶除去引物模板雙鏈體3'末端的封閉核苷酸（通常是雙脫氧）。在通過焦磷酸解作用除去封閉的核苷酸后，然后可以通過DNA聚合延長活化的引物。

由于PAP 的高特異性（1 / 3x10 ¹¹） ，該過程正成為 在大量過量野生型等位基因存在下檢測稀有突變，大雜合缺失，基因重復等的有力工具（Liu et al：Biotechniques），40 [2006]，661-668）。理論上，PAP可以檢測3× ^{10 11}個野生型等位基因中的單個堿基突變。

PAP可以被用來作為一種替代或證實的實時PCR （Boon等人： Prenat   DIAGN 27 [2007]，932-937）

KlenTaq -S和PAP反應。

已經(jīng)發(fā)現(xiàn)KlenTaq -S是 PAP反應中許多研究小組的合適的熱穩(wěn)定 Taq DNA聚合酶。

KlenTaq -S由該基因的5'缺失和F667Y（Tabor和Richardson）突變表達，編碼Thermus aquaticus DNA聚合酶。反復暴露于98 ⁰在PR1反應C緩沖區(qū)的酶不顯示活性的任何顯著損失。

KlenTaq - S的濃度：       10U /μl

建議的PAP反應條件（25μl ）：

50 mM Tris-HCl，7.8,16 mM硫酸銨，3.5 mM 氯化鎂，  25μM，每種四種dNTP，每種引物0.1μM，5-200 ng 模板，90μM無機焦磷酸鹽（Na ₄ PPi），2％二甲基亞砜（DMSO） ），2.5 U KlenTaq -S。

騎行條件：

95 ⁰ Ç   為 1分鐘（變性），然后

94 ⁰ C持續(xù)15秒

60 ⁰ C持續(xù)30秒

64 ⁰ C持續(xù)30秒

68 ⁰ C 1分鐘

72 ⁰ C持續(xù)1-2分鐘，共25-45個循環(huán)

提供緩沖液  （ 10X PR1）：

500 毫米 的Tris-HCl，pH值7.8，160 mM的  （ NH ₄）₂ SO ₄，35 毫的MgCl ₂，1.5毫克/毫升BSA

訂購信息：

訂貨號 ：KTS-01

數(shù)量：                            100μl或1000 U /小瓶

價格：                                     $ 200 /小瓶（1000 U）

運費：              美國35美元（FedEx隔夜）