Kerafast EC1001說明書

Kerafast是一家總部位于波士頓的試劑公司，其主要任務(wù)是使科學(xué)界可以輕松訪問*的實驗室制造的研究工具。我們的產(chǎn)品組合包括細(xì)胞系，抗體，小分子，染料等，其中許多是其他地方所沒有的。自2011年成立以來，來自190多個機(jī)構(gòu)的研究人員已通過我們的在線平臺提供了創(chuàng)新試劑，該平臺可快速訪問材料，而無需經(jīng)過傳統(tǒng)的“材料轉(zhuǎn)讓協(xié)議”流程。

我們?yōu)樘峁嶒炇姨幚硭械匿N售和運(yùn)輸物流，并從每次銷售中返還豐厚的特許權(quán)使用費。因此，我們有助于為實驗室節(jié)省時間和資源，同時為進(jìn)一步的研究產(chǎn)生額外的資金。采購科學(xué)家可以更輕松地發(fā)現(xiàn)和獲取通常在其他地方無法獲得的*試劑，同時還可以資助其他研究人員的工作。這創(chuàng)建了一個由科學(xué)家組成的社區(qū)，這些科學(xué)家為更大的利益貢獻(xiàn)和獲取試劑，以促進(jìn)他們自己的研究以及整體科學(xué)進(jìn)步。

2018年，Kerafast與英國公司Absolute Antibody合并，其愿景是向所有研究人員提供重組抗體技術(shù)。合并使兩家公司共同致力于改善科學(xué)界可用的研究工具的選擇。

Kerafast EC1001說明書

LOBSTR E. coli Expression Strain

LOBSTR大腸桿菌表達(dá)菌株

LOBSTR（低背景菌株）是一種用于表達(dá)重組多組氨酸標(biāo)簽蛋白的大腸桿菌菌株。該菌株已針對一步下游多組氨酸標(biāo)簽親和純化進(jìn)行了優(yōu)化，是表達(dá)能力差的蛋白質(zhì)的理想選擇。

強(qiáng)調(diào)：

• 通過減少大腸桿菌 ArnA和SlyD 的污染，獲得更高純度的重組多組氨酸標(biāo)簽蛋白
• 一步純化即可消除主要的大腸桿菌污染物
• 基于BL21（DE3）-與其他市售感受態(tài)細(xì)胞相同
• 純化具有挑戰(zhàn)性的低表達(dá)蛋白靶標(biāo)的理想選擇
• 也可用：BL21（DE3）-RIL版本-包含argU，ileY和leuW tRNA基因的額外副本，以及氯霉素標(biāo)記

大腸桿菌中表達(dá)的蛋白質(zhì)的多組氨酸標(biāo)簽親和純化的主要缺點是天然富含組氨酸的蛋白質(zhì)的存在，導(dǎo)致這些污染物的共純化。在LOBSTR，ArnA和SlyD中，兩種常見的大腸桿菌污染物已根據(jù)表面工程進(jìn)行了修改。LOBSTR維持正常的細(xì)胞生長，但顯著降低了ArnA和SlyD的多組氨酸標(biāo)簽結(jié)合親和力。與其他表達(dá)菌株相比，LOBSTR可產(chǎn)生更高純度的重組蛋白，可一步純化低表達(dá)的重組蛋白。

來自麻省理工學(xué)院Thomas U. Schwartz博士的實驗室。

產(chǎn)品規(guī)格

數(shù)據(jù)

LOBSTR和親本BL21（DE3）菌株顯示可比的增長

從0小時的初始同步直到終收獲，測量了LOBSTR和親本BL21（DE3）菌株的生長（OD600）。兩種菌株均攜帶相同的表達(dá)質(zhì)粒，并在37°C下生長直至OD600?0.7，此時在18、25和37C下誘導(dǎo)蛋白質(zhì)表達(dá)（黑色箭頭）。LOBSTR和BL21（DE3）的生長曲線分別以紅色和黑色顯示。兩種菌株在對數(shù)期和終細(xì)胞密度期間的細(xì)胞生長相似。取決于表達(dá)質(zhì)粒，觀察到不同的生長行為，但通常在LOBSTR和BL21（DE3）之間未觀察到生長差異。

從LOBSTR的His-tag純化中去除了ArnA和SlyD

顯示了使用普通金屬親和力樹脂從BL21（DE3）和LOBSTR純化得到的測試樣品。（A）使用Ni Sepharose 6FF樹脂（GE Healthcare）從親本BL21（DE3）菌株和LOBSTR中純化出七個蛋白質(zhì)構(gòu)建體。該構(gòu)建體編號為1-7，并含有6×His標(biāo)簽（1和4）或10×His標(biāo)簽（2、3、5→7）。洗脫樣品在SDS-PAGE凝膠上電泳，并用考馬斯藍(lán)R250染色。ArnA和SlyD用箭頭表示，靶蛋白用黑圈（△）表示。雙星號（**）表示Hsp15，這是另一種蛋白質(zhì)，在LOBSTR中顯示出降低的Ni結(jié)合親和力。（B）還在兩種另外的常用樹脂Ni-NTA（Qiagen）和Talon（Clontech）上從BL21（DE3）和LOBSTR純化構(gòu)建體1和5。在每種情況下，

改編自： Andersen KR等。蛋白質(zhì)。2013年11月; 81（11）：1857-61。