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    zeptometrix 0801198說明書

     更新時間:2020-02-10 點擊量:1165

    zeptometrix 0801198說明書

    Bovine IgG ELISA (96 Determinations)

    CATALOG# 0801198

    預期用途

    牛IgG-ELISA試劑盒是一種快速、簡便的酶聯免疫吸附試驗(ELISA)方法

    用于牛初乳、牛奶、血清、血漿或其他生物液體中牛IgG的測定。化驗結果包括

    大部分是現成的試劑,使用不到兩個小時。試劑盒中的微孔板和檢測抗體

    與牛IgG的所有亞類反應一致。

    免疫-TEK牛IgG-ELISA試劑盒僅供研究使用。

    試驗原理

    涂有牛IgG多克隆抗體的微孔板形成了檢測的捕獲階段。這些抗體

    與牛IgG的所有亞類均勻結合。捕獲的牛IgG然后與檢測抗體反應,檢測抗體是

    與牛辣根過氧化物酶結合的多克隆抗牛IgG。該試劑也與所有

    牛IgG的亞類。然后,以四甲基聯苯胺為底物,對井中的酶活性進行定量。

    試劑

    提供的材料:

    •微孔板(1x96孔):涂有純化山羊抗牛IgG的條帶

    檢測抗體(12毫升):含有共軛山羊抗牛IgG過氧化物酶

    •牛IgG標準品(7 mL):含牛IgG和檢測稀釋液

    •分析稀釋劑(100毫升):含有PBS、Triton X-100®和2-氯乙酰胺

    •洗板緩沖液(125毫升):含有PBS、吐溫20®和2-氯乙酰胺

    •底物(12毫升):含有四甲基聯苯胺(TMB)

    •停止溶液(12毫升):配方

    •微孔板密封劑(1 pk):每包10個密封劑

    •塑料袋(1袋):用于儲存未使用的微孔板條

    ?Triton X-100是Union Carbide Chemicals and Plastics Co.,Inc.的注冊商標。Tween 20是帝國化學工業的注冊商標

    需要但未提供的材料:

    •一次性手套

    •用于制備樣品和IgG標準稀釋液的試管和試管架

    •經驗證的單通道和多通道可調微量吸管

    •蒸餾水或去離子水

    •經驗證的培養箱能夠保持37℃+1℃

    •量筒和各種燒杯

    •經驗證的微量滴定板閱讀器

    •自動微量滴定板清洗機或手動真空抽吸設備

    •計時器

     

    儲存

    將所有試劑盒儲存在2-8°C。不要冷凍。未使用的微孔板條應保存在密封袋中,并用干燥劑

    盡量減少暴露在濕氣中。所有儲存和妥善處理的試劑都是穩定的,至少在到期日之前

    工具箱標簽。

    注意事項

    僅供研究使用。不用于診斷程序。

    •在進行分析之前,仔細閱讀所有說明。

    •在處理套件組件和試樣時使用通用預防措施*

    •為避免交叉污染,對每個樣本使用單獨的移液管。

    •在測試潛在感染性樣本時,遵守所有適用的地方、州和聯邦法規

    生物危險品的處置。

    •停止液中含有鹽酸,可能導致嚴重燒傷。如果接觸到眼睛或皮膚,請沖洗

    立即用水并尋求醫療救助。穿防護服和護目鏡。

    *《海洋資源綜合報告》,1988年6月24日,第37卷,第24期,第377-382、387-388頁

    試劑的制備

    洗板緩沖器

    使用前,用蒸餾水或去離子水稀釋10倍洗板緩沖液1:10。充分混合。準備1X洗板緩沖液

    可在2-8℃下儲存一周。如有以下情況,可訂購額外的10倍洗板緩沖液(ZMC目錄#:0801060)

    需要。

    牛IgG標準曲線

    如表所示,給6個試管貼上標簽。牛IgG標準品的濃度為125ng/mL,應在分析時稀釋

    稀釋如下以制備標準曲線。

     

    樣品稀釋

    牛初乳通常含有50-80毫克/毫升的IgG抗體。牛初乳1:1000000稀釋試驗

    初次試驗推薦使用稀釋劑。

    牛乳通常含有約0.5mg/mL的IgG抗體。初次試驗時,建議使用1:10000稀釋的試驗稀釋液稀釋牛乳。

    牛血清通常含有25-30毫克/毫升的IgG抗體。初次試驗時,建議使用1:500000稀釋的試驗稀釋液稀釋牛血清。

    試驗程序

    使用前讓所有試劑達到室溫。對用于制備標準品和試樣的試管貼上標簽。如果不使用整個96孔板,從板架上取下多余的板條,并用干燥劑放入可重新密封的塑料袋中。密封袋并在2-8°C下儲存。

     

    步驟1:在每個板條的末端標簽上貼上標簽,以確保在

    化驗。

    第2步:用移液管將200μl標準品1-6移到兩個孔中。

    第3步:用移液管將每個樣品200μl移到兩個孔中。

    步驟4:用封板器蓋住微孔板,在37℃下孵育30分鐘。

    第五步:吸出每口井的內容物,用1個洗板緩沖液清洗4次。洗的時候,把井灌滿

    300μl 1X洗板緩沖液并抽吸。執行4次加注/吸氣循環。在后一次清洗循環后,*清洗

    小心地在一塊吸水紙巾上敲擊盤子,以吸干盤子。繼續,直到沒有可見的液滴

    觀察洗板緩沖。

    第6步:用移液管將100μl檢測抗體移到每個標準品和樣品中。

    不要在基質空白處加入檢測抗體。

    第7步:用封板器蓋住板,在37℃下孵育30分鐘。

    步驟8:使用步驟6所述的洗板緩沖液洗板4次。

    第9步:用吸管將100μl基質吸進每個孔,包括基質空白孔。

    第十步:在室溫下孵育30分鐘。含有牛IgG的井中會出現藍色。

    第11步:用移液管將100μl停止液移到每個孔中。將發生從藍色到黃色的顏色變化。

    第12步:在15分鐘內,用微量滴定板閱讀器在450 nm處讀取每個孔的光密度。

    預期結果

    下面是標準曲線的示例,不應用于計算實際樣本。可以觀察到變化

    由于移液管、培養箱溫度、讀板器等原因,從一個實驗室到另一個實驗室。

     

    計算結果

    測試有效期:

    •為了使試驗有效,0 ng/mL標準品和基底空白的平均光密度必須低于0.200。

    •125 ng/ml的平均光密度必須大于1.000。

    •當平均光密度值不在標準曲線范圍內時,建議用較大或較小的稀釋度重新分析樣品。

    計算:

    一。計算每組標準品和稀釋樣品的平均光密度(OD)值。

    2。使用線性圖形紙或繪圖軟件,繪制每個標準在Y軸上的平均OD值與X軸上相應的標準濃度。

    三。通過這些點繪制宜擬合曲線以構建標準曲線。在大多數情況下,線性回歸圖是足夠的,但對于準確的結果,使用點對點或4參數logistic回歸。

    四。用標準曲線插值法測定每個稀釋樣品的IgG濃度。

    5個。乘以用于稀釋每個樣品的稀釋系數,以確定原始樣品的IgG濃度。

    PROCEDURAL FLOW CHART

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