qa-bio endo-f-multi-kit說(shuō)明書(shū)

推薦使用Endo F Multi-kit對(duì)由于在蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)中的聚糖位置而在非變性條件下對(duì)PNgase F裂解具有抗性的天然蛋白質(zhì)進(jìn)行去糖基化處理，因?yàn)橐阎@些酶對(duì)蛋白質(zhì)構(gòu)象的敏感性較低。

每一種酶的具有不同的N-連接的聚糖的特異性：
內(nèi)切糖苷酶F1斷裂這樣的高甘露糖和某些雜合型N-聚糖
內(nèi)切糖苷酶F2釋放雙觸角和高甘露糖聚糖（以40X減小的速率）
內(nèi)切糖苷酶F3將釋放triantennarry和巖藻糖基雙觸角N-聚糖

應(yīng)用：
–抗PNGase F切割的天然蛋白質(zhì)的去糖基化–
聚糖類(lèi)型的測(cè)定（高甘露糖，雙觸角，三/四臂觸角）
–脫糖基化時(shí)通常會(huì)沉淀的脫糖基化蛋白
– X射線晶體學(xué)

這三種酶在寡糖的核心中的兩個(gè)GlcNAc殘基之間裂解天冬酰胺連接的（N-連接的）寡糖，生成截短的糖分子，其中一個(gè)N-乙酰氨基葡糖殘基保留在天冬酰胺上，增強(qiáng)了蛋白質(zhì)的溶解性。相反，PNGase F可以完整清除寡糖。

使用說(shuō)明

1.向Eppendorf管中加入多達(dá)200μg糖蛋白。用去離子水將最終體積調(diào)整為34μl。
2.加入10μlEndo F2 / F3 5x反應(yīng)緩沖液，250 mM乙酸鈉pH 4.5。如果單獨(dú)使用Endo F1酶，請(qǐng)使用Endo F1緩沖液，250 mM磷酸鈉pH 5.5。
4.將2.0μl每種酶添加到反應(yīng)中。在37°C下孵育3小時(shí)。
通過(guò)SDS-PAGE監(jiān)控切割。