lumafluor 78R180說明書

78R180 Red Retrobeads™ IX (100 µl)

產品概述

RetroBeads Gamma Lumafuor是lumafuor公司第一款反向示蹤產品，也是唯1被證明有效的產品（該產品的有效性已被從無脊椎動物到無脊椎動物的數百篇研究論文證實）。

類別：產品內容

Cas  ：78R180

大小：100微升

品牌：lumafluor 

示蹤產物體內注射濃度高，不易擴散，信號強，對活細胞或活體無毒，存活時間一年以上。它與以下大多數示蹤劑、原位雜交檢測技術和免疫組織化學技術兼容。

部分產品信息如下：

紅色逆轉珠（100μl）

綠色逆向珠IX （100 μl）

紅色逆轉錄珠伽瑪IX（100μl）

本手冊總結了使用熒光乳膠微球（珠子）作為神經元逆行示蹤劑的大多數程序。有關綠色珠子的信息，請參閱本手冊的末尾。有關更多詳細信息，請參閱Katz，L.C的以下論文

1.Katz，L.C.，Burkhalter，A.和Dreyer，W.D.熒光乳微球逆行神經元Markerforinvivoandinvitros tudiesofvisual cortex.自然310 ：498-500（1984）

2.卡茨，L.C.和Iarovici，D.M.綠色熒光光層：新的逆行示蹤劑。神經科學34 ：511-520（1990）

魯馬福爾高效復古珠操作說明

1、 包裝和稀釋：

Lumafuor的珠子被包裝在一個密封的小瓶中，濃縮的珠子懸浮在蒸餾水中。如果使用紅色磁珠作為神經通路的反向示蹤，則推薦使用稀釋方法：1：4稀釋可用于大鼠視覺皮層，而不會降低磁珠熒光標記的強度和質量。但是，對于第一個實驗，我們不建議使用稀釋的磁珠，而是使用原始溶液進行注射示蹤。除蒸餾水外，NaCl和KCl等常規鹽溶液也可用作稀釋劑。如果使用綠色珠子，強烈建議使用不稀釋的儲備溶液。

2、 儲存：

為避免蒸發，珠子溶液應在冰箱中儲存4度。不要凍結它！冷凍豆子將無用且無法使用。干燥的珠子也不能使用（不能重新懸浮），產品沒有明顯的使用壽命。如果需要存儲，它可以存儲數年。

3、 注射：

珠子最好使用壓力注射，如1ml漢密爾頓微注射器或氣動注射系統。如果需要小面積顯微注射（30-50nl），可以使用末端直徑為30-50um的玻璃電極進行注射，而直徑較大的玻璃電極可用于常規反向示蹤（注射體積0.1-0.3ul）。然而，即使在較高劑量下，磁珠也不會從注射部位顯著擴散（通常小于1mm）。因此，為了盡可能完quan地標記投射到更大細胞核的神經元，需要多點注射。雖然磁珠帶負電，但不建議使用離子滲透法追蹤磁珠。

4、 生存時間：

在大多數恒溫脊椎動物系統中，檢測磁珠的最短有效時間為24小時。在48小時內，標記強度隨進樣時間增加，48小時后熒光強度保持不變。在冷血動物中，檢測珠子的推薦時間為1周。目前，尚未檢測到最長的珠子可檢測周期。然而，磁珠的熒光強度和質量可以在體內保持至少14個月不變，并且細胞可以被永jiu標記。在動物或神經元中沒有發現珠子的毒性作用。

五、固定與治療：

標準的固定方法是：洗滌或灌注0.1mpbs并固定在4%多聚甲醛（0.1mpbs制劑，pH7.4）中。用戊二醛固定會產生大量的組織自發熒光，這會阻礙用珠子標記的神經元。而且，在戊二醛固定組織中不會完quan觀察到綠色珠子，因此應盡可能避免。如果使用冷凍部分，則應用PBS沖洗切片并用明膠涂層載玻片干燥。風干后，載玻片應用二甲苯透明1分鐘，然后用氟鑲或氪密封。氟卡特可以從atomrgic chemetals Corp.（紐約法明代爾）購買;克里斯塔隆可以從以下位置購買

Harleco（EM Industries，新澤西州吉布斯敦）。切片只能短時間暴露在乙醇或二甲苯中，但長期暴露（超過 5 分鐘）會損壞珠子。磁珠對甘油非常敏感，在甘油環境中會很快提取熒光。因此，不應使用甘油密封劑。如果不可避免，可以使用水楊酸甲酯代替甘油作為密封劑。如果切片儲存在黑暗環境中，則用熒光珠標記的細胞一年內無法提取（但切片的熒光背景會增加）。到目前為止，還沒有珠子標記組織涂有塑料材料的記錄。

觀察：

紅色珠子中的染料是羅丹明，因此可以使用所有與羅丹明匹配的熒光濾光片。尼康公司的一些老式羅丹明濾光片由于背景較高，可能無法觀察到熒光珠。一般來說，蔡司和萊茨的標準羅丹明過濾器可以獲得更好的觀察效果。大多數綠色熒光濾光片都能很好地觀察綠豆的熒光結果。將濾光片設置為熒光黃色可以獲得強烈的明亮熒光，但也帶來了很高的背景干擾。結果表明，比窄帶濾光片更寬波段的熒光濾光片可以獲得更強的熒光信號。經過長時間的觀察和拍照，珠子的熒光沒有