ezbioscience B0003說明書

EZ-press Cell to cDNA Kit PLUS

產品概述

介紹

EZ-press 細胞轉 cDNA 試劑盒 PLUS 提供了一種快速簡便的方法，無需分離 RNA 即可從培養細胞中生產 cDNA。該試劑盒生成的cDNA適用于基因克隆和基因表達的定量分析，因此是TRIzol方法的良好替代品。

與TRIzol方法相比，該試劑盒具有以下幾個顯著優勢：

1.易于使用。從培養的細胞開始，只需兩個步驟（細胞裂解和逆轉錄）即可合成高質量的cDNA，無需RNA分離。

2.快速。整個實驗（從細胞到cDNA）可以在不到25分鐘的時間內完成。

3.穩定，可重復性強。在整個實驗過程中，總RNA被wan美保留，從而獲得穩定且高度可重復的結果。

4.靈敏度高。靈敏度高。每個樣品的檢測下限僅為100個細胞。

5. 沒有基因組DNA殘留。基因組DNA的去除比以前的版本更充分。此外，該試劑盒中使用的試劑安全無毒，與臭味和危險的TRIzol試劑相比，這是令人愉快的。

與EZ-press細胞轉cDNA試劑盒相比，模板RNA可以通過乙醇沉淀從細胞裂解物中收集，溶解在ddH 2 O中。然后可以通過分光光度計檢測RNA濃度，例如Nanodrop。因此，在隨后的RT反應中，每個樣品中可以等量的RNA用作模板。此外，EZ-press細胞到cDNA試劑盒PLUS具有更高的RT效率。該試劑盒進行的逆轉錄反應僅需15min即可完成。

實驗程序一覽

細胞裂解液解凍細胞裂解

緩沖液，倒置或輕彈試管數次以徹di混合（不要使用渦旋），然后將試管放在冰上。

1A.對于細胞數小于3×105/樣品的貼壁細胞：

a） 從孔中吸出培養基。

b）用PBS（200μl/孔）洗滌孔。在不干擾細胞的情況下盡可能wan全去除PBS。

c） 以 80 μl 細胞裂解緩沖液/1×105個細胞的比例向每個樣品添加細胞裂解緩沖液，輕輕上下移液 10 次以裂解細胞。您應該將 160ul 細胞裂解緩沖液添加到 2×105個細胞中）。

d）立即將4μl細胞裂解物轉移到新管中，加入0.8μlgDNA去除劑并輕輕混合。在25°C孵育5分鐘。

1B.對于細胞數大于3×105/樣品或懸浮細胞的貼壁細胞：

a）（僅適用于貼壁細胞，對于懸浮細胞，從步驟b開始）使用實驗室常規采用的傳代培養方法分離細胞。

b）計數然后輕輕沉淀細胞，丟棄生長培養基。

c） 通過將細胞重懸于每 1×105個細胞的 ~0.1 mL PBS 中來洗滌 PBS 中的細胞。

d）將一定量的細胞（~1×105）轉移到每個樣品的新1.5ml離心管中，以低速（~1000rpm，5min）離心細胞，然后小心地吸出PBS，而不會干擾細胞沉淀。

e） 向每個樣品中加入 80 μl 細胞裂解緩沖液，輕輕上下移液 10 次以裂解細胞。

f）立即將4μl細胞裂解物轉移到新管中，加入0.8μlgDNA去除劑并輕輕混合。在25°C孵育5分鐘。

2.將裂解物放在冰上，在30分鐘內進行RT反應。

注意：1.80μl細胞裂解緩沖液的容量約為1×105個細胞，根據細胞類型而變化。為了獲得最佳結果，強烈建議進行試點實驗以確定每次裂解的最佳細胞數。

2.在96、48、24和12孔細胞培養板中培養的細胞，細胞數不超過3×105，可在PBS洗滌后直接用于裂解。當處理超過3×105 /孔（或培養皿）的細胞時，請遵循程序1B：必須首先分離細胞（步驟a）。然后，將細胞培養基加入胰蛋白酶分離的細胞中，計數，低速離心并棄去上清液（步驟b），用適當體積的PBS重懸（步驟c），然后取~1×105個細胞/樣品用80μl細胞裂解緩沖液裂解（步驟d）。

3.細胞裂解物與任何其他常用的RT試劑不相容（使用其他RT試劑無法產生或很少的cDNA）。因此，必須使用該試劑盒中提供的特殊優化的RT試劑對細胞裂解物進行逆轉錄。

產品詳情

名稱      EZ-press Cell to cDNA Kit PLUS

編號     B0003

品牌     ezbioscience