CCK-8細胞活性檢測試劑盒說明書

CCK-8細胞活性檢測試劑盒說明書

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產品詳情

  產品描述

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 細胞活性檢測試劑盒是一種廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性相關實驗的快速、高靈敏度檢測試劑盒。

CCK-8 的主要成分為水溶性四唑鹽[Water Soluble Tetrazolium-8] (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，Water Soluble Tetrazolium-8是一種類似于MTT 的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜（Formazan，參考圖1)。

Water Soluble Tetrazolium-8被細胞內脫氫酶生物還原后生成的甲臜能夠直接溶解在培養(yǎng)基中。活細胞的數(shù)目越多，則顏色越深。對于同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數(shù)目呈線性關系。

圖1. Water Soluble Tetrazolium-8分子結構及CCK-8檢測原理

產品特點

1.   MTT 法生成的甲臜不是水溶性的，需要使用DMSO 等有機溶劑溶解；而CCK-8 產生的甲臜是水溶性的，省去了溶解步驟，因此減少了該操作步驟帶來的實驗誤差。

2.   由于CCK-8 產生的甲臜是水溶性的，無需吸掉培養(yǎng)基后，再用DMSO 等有機溶劑溶解，非常適合用于懸浮細胞的活性測定。

3.   與MTT 方法相比，CCK-8 法線性范圍更寬，靈敏度更高。

4.    CCK-8 法對細胞無毒性，可以多次測定，選取最佳測定時間。

5.    CCK-8 法無需配制，即開即用。

6.   CCK-8 法適合大規(guī)模、高通量的樣品檢測。

使用方法

使用方法

1.   在96 孔板中配制100 μL 的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)24 小時（在37℃，5% CO₂的條件下）。

2.    向培養(yǎng)板加入10 μL 的待測藥物進行處理。

3.  根據(jù)實驗需要，將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段時間 （例如：6, 12，24 或48 小時）。

注：如果不進行藥物處理而直接測定細胞的活性，則不需要2-3 步驟，直接從第4 步操作。

4.    向每孔加入10 μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響O.D 值的讀數(shù)）。

5.   將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育2-4 小時。

6.   用酶標儀測定在450 nm 處的吸光度。

7.   如果暫時不測定OD 值，可 以向每孔中加入10 μL 1% SDS（w/v） 溶液或者 0.1 M HCl 溶液，并蓋上培養(yǎng)板蓋子，在室溫條件下避光保存。24 小時內吸光度不會發(fā)生變化。

實驗案例分析

圖2. 本實驗結果證明：上海起發(fā)CCK8與同仁CCK8的測試效果幾乎相同。

注意事項

1.     由于96 孔板周圍一圈最容易蒸發(fā)，周圍一圈建議不用，改加PBS或水。

2.    CCK-8 檢測細胞活性的原理是通過檢測活細胞脫氫酶催化的反應。如果待測體系中存在還原劑（例如一些抗氧化劑），可能會干擾檢測結果，需設法去除其影響。

3.  當使用標準96 孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為1,000 個/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 (100 μL培養(yǎng)基)，且加入CCK-8后孵育的時間長一些。

4.   如果細胞培養(yǎng)時間較長，培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化，應洗滌細胞更換培養(yǎng)基后再加CCK-8 檢測。

5.   酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響。培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除只含有培養(yǎng)基的對照孔中本底的吸光度而消除，因此不會對檢測結果造成影響。